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綜合評(píng)價(jià)C18色譜柱性能的實(shí)驗(yàn)方法介紹
液相色譜中使用C18柱的反相色譜法以生物體相關(guān)物質(zhì)為分析對(duì)象，能夠滿足主要研究領(lǐng)域的需要，使用。而隨著硅膠原料、鍵合方式、封尾方式的不同，生產(chǎn)出的色譜柱性能也不同，市場(chǎng)上則因此有數(shù)以百計(jì)性能不同的C18柱。而評(píng)價(jià)這些色譜柱的性能一般需要從以下4點(diǎn)入手：
1、對(duì)化合物的保留能力；
2、對(duì)酸性及中性化合物的理論塔板數(shù)和峰形；
3、對(duì)性（堿性）化合物的峰形；
4、對(duì)配位化合物的峰形。
針對(duì)上述四點(diǎn)原則，本公司建立了統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，以此來(lái)評(píng)價(jià)自己生產(chǎn)的C18色譜柱。
具體測(cè)定方法如下：
樣品：尿嘧啶-甲苯-苯乙烷-阿米替林-醌茜五種物質(zhì)混合物；
CoMetro液相色譜儀-等度系統(tǒng)（包括：6000LDI恒流泵，6000PVW紫外/可見可編程檢測(cè)器）；
紫外/可見檢測(cè)器：波長(zhǎng)210nm；
流動(dòng)相：5mmol/L磷酸鹽緩沖液（pH=7）-甲醇=20:80；
流速：1.0mL/min；
柱溫：25℃
在此方法下，這五種物質(zhì)的色譜行為都能夠側(cè)面反映色譜柱某一項(xiàng)性能的大致情況，有較好的科學(xué)性和說(shuō)服力，這五種物質(zhì)的結(jié)構(gòu)是及具體作用如下：
| 尿嘧啶
| 典型的性化合物，親水性*，在C18色譜柱中幾乎沒有保留，則可以用來(lái)測(cè)定系統(tǒng)的死時(shí)間。 |
| 甲苯/苯乙烷
| 非性化合物，不會(huì)與C18色譜柱中的殘余硅羥基作用，則可以用來(lái)標(biāo)定色譜柱的理論塔板數(shù)，同時(shí)其峰形良好也是對(duì)色譜柱的基本要求。 |
| 阿米替林
| 含氮有機(jī)堿，在中性環(huán)境下能形成穩(wěn)定的氮正離子，能與色譜柱中的殘余硅羥基形成靜電作用，其拖尾因子能側(cè)面反映色譜柱殘余硅羥基的數(shù)量。 |
| 醌茜
| 典型的螯合物，能與色譜柱中的金屬離子作用，其拖尾因子則可以側(cè)面反映出色譜柱中金屬離子的含量。 |
